Biochemie

(Meine Diplomarbeit in Biologie 1973)



 




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Biochemie
Pionier-Arbeit über Proteininhibitoren :

Meine Diplomarbeit in Biologie 1973 in Köln

Schlüsselwörter: Bierhefe, Enzyme, Enzymkinetik, Katalyse, Proteine, Proteininhibitoren, SH-Bindungen

Kinetik der Reaktion der SH-Gruppen der Alpha-Glucosidase C
aus Saccharomyces cerevisiae mit Sulfhydryl-Reagentien
EINLEITUNG
SH-Gruppen gehören zu den funktionellen Gruppen der Proteine.Sie können über die Bildung von Disulfidbrücken wesentlich am Aufbau der dreidimentionalen Struktur beteiligt sein und so zu ihrer Stabilisierung beitragen.

Die freien SH-Gruppen können über H-Brückenbildung mit entsprechenden anderen funktionellen Gruppen der Proteinkette ebenfalls die Raumstruktur mitbestimmen. Allerdings sind die Akzeptoreigenschaften des Schwefels sehr viel schlechter als die des Sauerstoffes, so daß die SH-Gruppe hauptsächlich als Protonen-Donator in Frage kommt.SH-Gruppen können aber auch als essentielle Gruppe die Katalyse einleiten bzw. an der Bindung zwischen Enzym und Substrat mitwirken.

Die Alpha-Glucosidase ( aus Bierhefe ) ist ein Enzym bei dem zwei SH-Gruppen nachgewiesen werden konnten wobei eine Gruppe davon essentiell ist, und am aktiven Zentrum lokalisiert ist, zumindest aber in unmittelbarer Nähe des Katalyseortes ( 1 ). Die eingentliche Katalyse erfolgt wahrscheinlich durch die Beteiligung eines Carboxylat-lons am aktiven Zentrum. Durch SH-spezifische Reagenzien wie, 5,5'-Dithiobis (2-Nitrobenzoesäure), DTNB ( 2 ) und dem daraus hergestellten 3,5'Dithiobis-(2-Nitrobenz-hydroxyäthylamid), DTNBHA, ( 3 ) können die SH-Gruppen blockiert werden.Dadurch wird das Enzym irreversibel inaktiviert.

Die beiden Reagenzien unterscheiden sich durch die Ladung. DTNB ist negativ geladen, DTNBHA ist dagegen ungeladen und sterisch etwas größer.

























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